抗體生產(chǎn)通常涉及用感興趣的蛋白質(zhì)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫以刺激免疫反應(yīng)。一旦蛋白質(zhì)被抗原呈遞細(xì)胞處理以能夠通過循環(huán) B 淋巴細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),就可以從血清中純化抗體(多克隆抗體制劑),或者分離 B 細(xì)胞并用于雜交瘤生產(chǎn)(單克隆抗體制劑)。為了使這些方法有效,蛋白質(zhì)必須高度純度且不含可能引起動(dòng)物宿主不良反應(yīng)的內(nèi)毒素。在生產(chǎn)針對(duì)半抗原的抗體時(shí),通常的做法是將這些小的非免疫原性分子與較大的載體蛋白(例如匙孔血藍(lán)蛋白 (KLH) 或牛血清白蛋白 (BSA))綴合。
蛋白質(zhì)如何充當(dāng)對(duì)照和參考標(biāo)準(zhǔn)?
任何精心設(shè)計(jì)的免疫測(cè)定都將包括陽性和陰性對(duì)照,以分別確定最大測(cè)定信號(hào)和非特異性背景染色的程度。蛋白質(zhì)通常在定性免疫測(cè)定中用作陽性對(duì)照,例如蛋白質(zhì)印跡,它們用于驗(yàn)證樣品材料中相同目標(biāo)的檢測(cè);在定量應(yīng)用中,例如酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 (ELISA),它們用于生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。對(duì)于定量方法,通常的做法是連續(xù)稀釋蛋白質(zhì),從而產(chǎn)生 S 形濃度曲線;然后可以據(jù)此計(jì)算任何測(cè)試樣品中目標(biāo)蛋白的濃度。